現代刺客組織聯絡正在使用基因記憶追溯軟體的玩家，
要求進入活躍於工業革命晚期兩位英國孿生刺客的記憶，
從而比跨國製藥公司搶先取得位於倫敦的第一文明遺物伊甸碎片。
西元 1868 年英國刺客組織已近滅絕，首都倫敦被聖殿騎士團和暴徒幫 全面控制。刺客姊弟雅各和伊薇於克勞利各自刺殺了騎士團工業家盧波特費里斯
與科學家大衛布魯斯特後前往倫敦，在印籍刺客亨利葛林安排下
按各自的方式解放城市：雅各欲成立幫派 黑鴉幫 對抗
暴徒幫和刺殺各騎士團要員；伊薇則欲找尋先父追尋的伊甸碎片。
雅各先後刺殺醫生約翰艾略森、交通公司總裁珀爾愛德威、
銀行家菲利普兩便士、英國陸軍軍官詹姆士布魯內爾、
以及暴徒幫首領麥斯威爾羅斯；同時伊薇從騎士團奪回的檔案
發現該伊甸碎片乃賦予持有者復原能力之伊甸聖裹布，
被藏於白金漢宮地下一密室中，追查過程中除刺殺了聖殿騎士團要員
露西梭恩亦糾正了雅各在其刺殺行動中無意造成的社會問題。
雅各和伊薇因不滿各自行動後造成的結果而爭吵，
在接獲亨利報告聖殿騎士團大團長克羅佛特史塔瑞將前往皇宮
奪取聖裹布後決定作最後一次合作並一同潛進皇宮，
但史塔瑞搶先到達密室取得聖裹布並因而擁有迅速治癒傷口的能力，
雅各和伊薇合力擊殺史塔瑞後把聖裹布留在密室內並決定往後繼續合作，
事後獲維多利亞女王封爵。
現代刺客組織前往密室後發現現代聖殿騎士團已捷足先登，
儘管進行伏擊仍無法阻止騎士團把聖裹布帶走；
刺客從電腦取得之視訊顯示騎士團欲以聖裹布使第一文明成員復活；
藏身於網路內之第一文明成員朱諾於幕後操縱現代聖殿騎士團，
並透露將利用聖裹布拯救人類。
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