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我家屁孩🐶 ᴍɪʀᴜᴋᴜ
最近當 #狗奴 好忙💦
這幾天帶牠打疫苗啦～
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灰貴賓
幼犬時是歐嚕嚕
媽咪正等待它褪色🥰
（ 其實黑黑一坨也蠻可愛🖤）
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🏷️ 〚 #奈_時事補補 〛
#疫苗💉 #covid19 #
❝ 京站威秀員工確診「Ct值僅13」❞
👉🏾突然有人問我
：『 CT值13很可怕嗎❓ 』
因為新冠肺炎🦠很小很小～
因此需要做PCR👉🏾「病毒核酸檢測」
而測出 #CT值，全名為cycle threshold「循環數閥值」
檢測時需要❝ 不斷放大❞ 觀測
直到可觀測範圍‼️
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每放大一次（為2的次方倍）☛ 稱為CT值=1
若CT值13 ☛ 為放大2 ¹³ 達可觀測
若CT值40 ☛ 為放大2 ⁴⁰ 才可觀測
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▫️越高表示要放大、放大、再放大
才能檢測出來～
☛ 身體病毒量低，幾乎不具傳染性❌
▫️反之CT值13，放大一下 就能觀測～
登愣‼️表示確診了
☛ 則顯示體內病毒量高，且傳染力較強😱
✦ 多少能解除隔離呢？
台灣近期放寬調整為Ct 值≥30
⚠️ 各國的標準也不一樣
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ヽ༼ಢ_ಢ༽ﾉ #台灣加油 #你的小傲嬌 ♥
#補腦時間 #防疫期間 #共體時艱
pcr cycle數 在 [求救]PCR一直跑不出來- 看板Biotech 的推薦與評價
大家好，實驗室同伴跑PCR一直跑不出來，這實驗曾經一度有做出來過，只是後來不知怎
麼地就一直失敗，持續失敗了半年，也爬過很多文，就是找不出方法。實驗室的學長、助
理(我)都跳進來幫忙做過，因為大家都是這方面的新手，所以一開始一直以為是操作問題
，所以用相同的條件重複了n次，primer、polymerase也都重買過，還是出不來。後來因
為有了positive control，positive control 都有跑出來，但想要的 gene 就是跑不出
來，而且都有拖帶，希望大家能給一點改善的意見，謝謝！
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我們有 blast 確定設計的 primer 專一性沒問題，也可以夾出要的 gene。
F primer 的長度是36, GC%=44 Tm=64.4
R primer 的長度是37, GC%=54 Tm=68.9
gene大小是 2.8 kb
postive control是 2 kb
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下面是幾張在有postive control後，跑膠的結果
一開始用的是下面的條件：
PCR program：
1. 95’c, 30sec
45~55’c, 30sec
72’c, 2mins (35 cycles)
2. 72’c, 8mins
3. 16’c, hold
genomic DNA template ： 50 ng
dNTP：500 μM
F&R primer：0.5 μM
10x buffer：2 μL
sterile DI water：13 μL
Pro Taq Plus DNA Polymerase：2 units
*total reaction： 20 μL
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爬了一些關於有拖帶的文章，看到了幾個可能原因：
1.template濃度太高
2.dNTP濃度太高
3.primer濃度太高
4.cycle數太多
5.annealing溫度太低
以及有些版友推薦在 reaction 加 1~5% 的 DMSO
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所以做了一些改變
PCR program：
1. 95’c, 30sec
2. 95’c, 30sec
50~65’c, 30sec
72’c, 2mins 30sec (30 cycles)
3. 72’c, 8mins
4. 10’c, hold
genomic DNA template ： 50 ng
dNTP：200 μM
F&R primer：0.2 μM
10x buffer：5 μL
sterile DI water：40 μL
Pro Taq Plus DNA Polymerase：2 units
*total reaction： 50 μL
結果還是一樣拖帶....Orz
想請問大家還有其他改善方法嗎？
是應該在增加DMSO濃度？還是說還是太多cycle嗎？
版上有看到有些人建議加 Betaine，但因為看到這種解決多是增對 GC rich 的片段，加
上我們實驗室沒有，請問有需要添購嗎？
拜託大家幫幫忙了!!!!非常感謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.120.93.70
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1467621799.A.2F7.html
稀釋成 5ng/50μL 結果連postive control 都沒出來了囧
※ 編輯: pongpongding (111.83.149.104), 07/04/2016 18:17:50
結果今天試了，都沒成功，10%的在<200bp的地方竟然還出現一條band，不知為何><
是之後要做突變的
較好嗎？
※ 編輯: pongpongding (114.38.149.138), 07/05/2016 07:49:58
quality比較好的gDNA先確定實驗p不出來是不是primer的問題
※ 編輯: pongpongding (140.120.93.70), 07/05/2016 10:23:01
※ 編輯: pongpongding (140.120.93.70), 07/05/2016 14:48:46
※ 編輯: pongpongding (140.120.93.70), 07/05/2016 15:01:10
看～
※ 編輯: pongpongding (111.83.204.77), 07/09/2016 06:49:07
※ 編輯: pongpongding (111.83.204.77), 07/09/2016 06:49:32
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